Il principio di funzionamento di una pipetta Pasteur si basa principalmente sul flusso guidato dalla gravità-e sull'azione capillare, combinati con il controllo manuale dei differenziali di pressione dell'aria per facilitare l'aspirazione e il trasferimento dei liquidi.
Controllo manuale dell'aspirazione: l'operatore applica l'aspirazione all'estremità larga della pipetta-per via orale o utilizzando un bulbo di gomma ausiliario-per creare una pressione negativa all'interno del tubo, aspirando così il liquido nella punta sottile.
Erogazione guidata dalla gravità-: una volta rilasciata l'aspirazione, il liquido fuoriesce naturalmente sotto l'influenza della gravità; la dispensazione può anche essere assistita premendo delicatamente il corpo della pipetta o inclinando il recipiente ricevente.
Riproducibilità delle goccioline: calibrando il rapporto di "gocce per millilitro", la pipetta consente un trasferimento quantitativo approssimativo, rendendola adatta per procedure che richiedono ripetibilità piuttosto che precisione assoluta.
Garanzia di sterilità: prima dell'uso, è possibile inserire un tampone di cotone nell'estremità larga e sterilizzarlo per prevenire la contaminazione microbica durante la manipolazione-una pratica particolarmente comune negli esperimenti microbiologici.